Frotis sanguíneo y test de Knott modificado

Para qué sirve

Dos búsquedas distintas. En la sangre se buscan protozoos, la mayoría dentro de glóbulos rojos o blancos, y larvas de nematodos filarioideos, las microfilarias, que circulan libres. Para los primeros se usa un frotis teñido; para las segundas, técnicas que las concentran (Zajac et al., 2021).

El frotis también informa de la sangre. Como muchos hemoprotozoos causan anemia, el mismo frotis sirve para ver alteraciones de los glóbulos rojos (Zajac et al., 2021).

No reemplaza a las pruebas inmunológicas. Para varios parásitos de la sangre, las pruebas inmunológicas y moleculares son más sensibles que el microscopio, sobre todo en infecciones crónicas por hemoprotozoos y en el gusano del corazón (Zajac et al., 2021).

Qué detecta y qué no

Detecta:

• Tripanosomas, como Trypanosoma cruzi, en la fase aguda (Zajac et al., 2021).
• Otros hemoprotozoos y bacterias de la sangre, como Babesia o los hemoplasmas (ver las fichas de babesiosis y micoplasmosis hemotrópica del sitio).
• Microfilarias, como las de Dirofilaria immitis (Zajac et al., 2021).

No detecta:

• Infecciones crónicas con parasitemia baja (Zajac et al., 2021).
• Perros con gusano del corazón sin microfilarias, por cargas bajas, gusanos de un solo sexo, eliminación inmune de las microfilarias o preventivos que las matan (Zajac et al., 2021).

El frotis delgado teñido

Hacerlo. Una gota de sangre en un extremo del portaobjetos se extiende con otro portaobjetos inclinado, que primero toca la gota para que se reparta a lo ancho y luego se desliza hacia adelante en un solo movimiento. El resultado debe ser una capa fina y pareja (Zajac et al., 2021).

Tinción. El Giemsa es la más eficaz para hemoprotozoos; el Wright también sirve en la mayoría de los casos, y las tinciones rápidas comerciales tiñen los parásitos, pero con peor calidad (Zajac et al., 2021).

El Giemsa en resumen. El frotis se seca al aire, se fija en metanol y se cubre con Giemsa diluido en agua destilada durante unos 30 minutos; el colorante diluido se prepara fresco. El citoplasma del parásito queda azul y los núcleos magenta (Zajac et al., 2021). Cada laboratorio sigue el protocolo del fabricante del colorante.

Lectura. Se recorre a 40X y se usa el objetivo de inmersión cuando aparece algo sospechoso. El tamaño se mide mejor con un micrómetro ocular; si no hay, se compara con el tamaño de los glóbulos rojos del propio animal (Zajac et al., 2021). Como referencia, el glóbulo rojo del perro mide cerca de 7 µm (Zajac et al., 2021).

Técnicas para microfilarias

De menos a más sensible (Zajac et al., 2021):

Técnica	Qué se hace	Ventaja	Límite
Gota fresca	Una gota de sangre con anticoagulante y cubreobjetos, a 10X	Rápida; muestra el movimiento	Poco sensible
Tubo de microhematocrito	Se centrifuga el tubo y se mira el plasma justo sobre la capa de leucocitos	Rápida	Apenas más sensible que la gota
Test de filtro	1 mL de sangre con solución de lisis pasa por un filtro, que se examina	Concentra; igual de sensible que el Knott	No permite medir bien para identificar
Knott modificado	1 mL de sangre con formalina diluida, centrifugado y teñido	Concentra, mide e identifica	Más lento

Cuál usar como tamizaje. Como la gota y el microhematocrito pueden pasar por alto infecciones con pocas microfilarias, para tamizaje se usa una técnica de concentración (Zajac et al., 2021).

El test de Knott modificado

El principio. La formalina al 2% es hipotónica: rompe los glóbulos rojos y fija a las microfilarias. Con formalina al 10%, la de fijar tejidos, también se fijan los glóbulos rojos y no se rompen, y el test no funciona (Zajac et al., 2021).

En la práctica. Se mezcla 1 mL de sangre con anticoagulante con 9 mL de formalina al 2%, se centrifuga como para una flotación fecal, se descarta el sobrenadante y el sedimento se tiñe con azul de metileno diluido y se lee entero a 10X (Zajac et al., 2021).

Qué se ve. Las microfilarias quedan estiradas, con los núcleos teñidos de azul (Zajac et al., 2021).

Un error frecuente. Si la sangre y la formalina no se mezclan bien, los glóbulos rojos no se rompen del todo y el sedimento es difícil de leer (Zajac et al., 2021).

Cómo identificar la microfilaria

Medir. El largo, el ancho y la forma de la cabeza ayudan a separar las especies; se miden con micrómetro ocular (Zajac et al., 2021).

D. immitis frente a A. reconditum (Zajac et al., 2021):

Rasgo	D. immitis	A. reconditum
Largo	295 a 325 µm	250 a 288 µm
Cabeza	Afinada	Roma
Cola	Recta	Variable, en gancho
Movimiento en sangre fresca	Se mueve sin avanzar	Avanza

Cuidados al medir (Zajac et al., 2021):

• Las medidas de referencia son de microfilarias fijadas en formalina; otros fijadores o soluciones cambian el tamaño.
• En sangre guardada más de 3 días, la microfilaria de D. immitis puede encogerse hasta el tamaño de la de A. reconditum.

En Chile. Es una inferencia de Evidencia Vet: con D. immitis ya descrita en el norte y en Concepción, medir la microfilaria en un Knott es la forma de separarla de otras especies cuando no hay PCR.

Dónde encaja el antígeno

La prueba más sensible en el perro. El test de antígeno es la técnica más sensible para el gusano del corazón; las técnicas de microfilarias son menos sensibles (Zajac et al., 2021).

Por qué hacer las dos. Un perro con antígeno positivo siempre se examina en busca de microfilarias, para decidir si necesita tratamiento microfilaricida (Zajac et al., 2021). En Alemania, solo el 54% de los perros positivos tenía microfilarias (Maerz et al., 2026).

Falsos negativos del antígeno. Los complejos antígeno-anticuerpo pueden ocultar el antígeno; calentar o tratar la muestra lo libera (Zajac et al., 2021). En Alemania, 8 de 283 perros con antígeno negativo resultaron positivos al calentar la muestra (Maerz et al., 2026).

Errores frecuentes

Error	Qué produce	Fuente
Usar formalina al 10% en el Knott	Glóbulos rojos que no se rompen	Zajac et al. (2021)
Mezclar mal sangre y formalina	Sedimento difícil de leer	Zajac et al. (2021)
Medir microfilarias de sangre guardada	D. immitis confundida con A. reconditum	Zajac et al. (2021)
Usar la gota fresca como tamizaje	Infecciones con pocas microfilarias no detectadas	Zajac et al. (2021)
Descartar Chagas crónico con un frotis negativo	Infecciones crónicas no detectadas	Zajac et al. (2021)
Frotis grueso o desparejo	Parásitos tapados por células superpuestas	Inferencia de Evidencia Vet

Lo que no se sabe

• Qué técnicas de microfilarias usan hoy las clínicas chilenas.
• Si en Chile circulan otras microfilarias de perro, como A. reconditum, que haya que separar de D. immitis.

Referencias

1. Maerz, I., Rütjes, S., Genz, S., & Žagar, P. (2026). Adulticide treatment with melarsomine: outcome in 283 heartworm-positive dogs in Germany. Parasites & Vectors, 19(1), 356. https://doi.org/10.1186/s13071-026-07404-2
2. Zajac, A. M., Conboy, G. A., Little, S. E., & Reichard, M. V. (2021). Detection of parasites in the blood. En Veterinary clinical parasitology (9.ª ed., cap. 3, desde la p. 207). Wiley-Blackwell.