Examen de piel y branquias en peces: frotis, biopsias, puntaje branquial y conteo de Caligus

Para qué sirve

Muestras de pez vivo. Los ectoparásitos de peces se diagnostican con varias técnicas no letales: frotis de piel, biopsia de aleta y biopsia de branquia. Pueden hacerse sin anestesia, aunque una sedación suave facilita el trabajo y reduce el estrés del pez (Zajac et al., 2021).

El diagnóstico parte en el agua. En peces, la calidad del agua y el ambiente pesan tanto como el parásito. Es una inferencia de Evidencia Vet: por eso el examen de piel y branquias se interpreta junto con la temperatura, la salinidad, el oxígeno y la historia del lote.

Dónde encaja. Esta página reúne las técnicas que se nombran en las fichas de Caligus rogercresseyi, Ichthyophthirius multifiliis y Neoparamoeba perurans.

Qué detecta y qué no

Detecta:

• Protozoos de piel y branquia, como Ichthyophthirius y otros ciliados y flagelados (Zajac et al., 2021).
• Amebas en el mucus de lesiones branquiales, como N. perurans (ver la ficha del parásito).
• Monogeneos de piel y branquia (Zajac et al., 2021).
• Copépodos como Caligus, a simple vista, durante el conteo.

No detecta:

• Parásitos internos, que requieren necropsia.
• La especie de ameba o de bacteria: para eso están la PCR y la histopatología.
• La causa de un daño branquial: un puntaje alto describe lesiones, no dice qué las produjo (Fridman et al., 2021).

Antes de muestrear

Elegir los peces. Es una inferencia de Evidencia Vet: se toman peces que muestren el problema, como los que nadan en la superficie, boquean o tienen lesiones, además de algunos aparentemente sanos para comparar.

Anestesia. Para el conteo de Caligus y el puntaje branquial, el pez se anestesia en una batea con la dosis de la ficha técnica del producto, se examina lo más rápido posible y se confirma que se recupere bien (Cermaq Chile, 2023).

El agua del montaje. Cada muestra se monta en una gota del agua donde vive el pez: dulce para peces de agua dulce y de mar para peces marinos. El agua potable de la red y la destilada no sirven (Zajac et al., 2021).

Frotis de mucus

Qué se toma. Mucus y células superficiales de una zona pequeña del costado del pez (Zajac et al., 2021).

Cómo. Con una hoja de bisturí o el borde de un cubreobjetos, deslizando con suavidad de la cabeza hacia la cola (Zajac et al., 2021).

El cuidado clave. La presión debe ser mínima: dañar la piel abre la puerta a infecciones secundarias y altera la osmorregulación del pez (Zajac et al., 2021).

Montaje. El mucus va de inmediato a la gota de agua, con cubreobjetos, y se examina al microscopio (Zajac et al., 2021).

Para amebiasis branquial. El mucus se toma de una lesión branquial y se busca la ameba con su parasoma (ver la ficha de N. perurans).

Biopsia de aleta

Qué se toma. Un trozo pequeño del borde de una aleta, por ejemplo la pectoral (Zajac et al., 2021).

El costo para el pez. Es más traumática que el frotis de mucus (Zajac et al., 2021).

Montaje. El tejido se extiende sobre el portaobjetos en la gota de agua, con cubreobjetos (Zajac et al., 2021).

Biopsia de branquia

Qué se toma. Se levanta el opérculo y, con una tijera fina, se cortan las puntas de algunos filamentos branquiales (Zajac et al., 2021).

Poco sangrado. Como solo se cortan las puntas, el sangrado es mínimo (Zajac et al., 2021).

Por qué importa. Es una inferencia de Evidencia Vet: hay infecciones que solo afectan la branquia y no dan signos visibles en la piel, como el ich branquial. En un lote con dificultad respiratoria o mortalidad sin causa clara, la biopsia de branquia es la muestra que más rinde.

Cómo leer las muestras

De inmediato. Muchos parásitos de peces se reconocen por cómo se mueven, y se deforman o mueren al secarse. Es una inferencia de Evidencia Vet a partir de lo que describe Zajac et al. (2021) para los ciliados de piel y branquia.

Qué buscar (Zajac et al., 2021; fichas de este manual):

Parásito	Rasgo en el montaje
Ichthyophthirius multifiliis	Ciliado grande y redondo con macronúcleo en forma de C
Neoparamoeba perurans	Ameba con uno o más parasomas junto al núcleo
Monogeneos	Gusanos planos pequeños, con un órgano de fijación posterior

Puntaje branquial

El puntaje de amebiasis branquial. Se evalúan a simple vista las 16 superficies hemibranquiales, las dos caras de los ocho arcos, en peces anestesiados. Se puntúan las manchas y parches blancos y mucosos en una escala de 0, branquias limpias, a 5, lesiones extensas. Fue descrito en Tasmania y está pensado para detectar la enfermedad desde el inicio (Taylor, 2016).

Para qué sirve. Seguir la frecuencia de cada puntaje y el promedio en el tiempo ayuda a decidir el manejo del stock y los baños de agua dulce (Taylor, 2016).

Sus límites. Los operadores lo aplican de forma distinta: unos puntúan todos los arcos y otros solo el más afectado (Fridman et al., 2021).

Un puntaje total probado en Chile. En un brote de enfermedad branquial en un centro chileno de salmón del Atlántico, Fridman et al. (2021) probaron un puntaje que considera todo el daño branquial y no solo las lesiones de amebiasis:

Puntaje	Grado	Superficie afectada
0	Sin lesiones	0%
1	Muy leve: manchas focales y erosión leve de las puntas	1 a 5%
2	Leve: manchas que se juntan y más erosión de las puntas	5 a 20%
3	Moderado: erosión de varios filamentos, engrosamiento y necrosis localizada	20 a 50%
4	Avanzado: filamentos acortados a la mitad, palidez y melanización	50 a 75%
5	Grave: necrosis extensa y pérdida casi total de la arquitectura	más de 75%

Cómo se comparó. El puntaje total se correlacionó con la histología con un coeficiente de 0,64, y el puntaje clásico de amebiasis, con 0,24. Muchos peces con lesiones visibles tenían 0 en la escala clásica. El estudio fue un solo brote, con peces en etapa de cicatrización, y los autores advierten que el sistema debe validarse en otros centros (Fridman et al., 2021).

Lo que esto implica. Es una inferencia de Evidencia Vet: en Chile, donde la amebiasis convive con otras causas de daño branquial, el puntaje clásico puede subestimar el problema. Ningún puntaje reemplaza a la histopatología ni a la PCR para saber la causa.

Conteo de Caligus

El marco. El conteo sigue el Programa Sanitario Específico de Vigilancia y Control de Caligidosis de Sernapesca (Res. Ex. 60/2022) y su guía de vigilancia de enero de 2022 (Sernapesca, 2022).

Cómo se hace, según el plan de una empresa que aplica ese programa (Cermaq Chile, 2023):

Aspecto	Centros de vigilancia alta	Centros de vigilancia baja y Magallanes
Jaulas	6 consecutivas, o todas si hay menos	4 consecutivas, o todas si hay menos
Peces	10 por jaula	10 por jaula
Frecuencia	Semanal	Mensual

Qué se cuenta (Cermaq Chile, 2023):

• Juveniles o chalimus, que se encuentran también al tacto.
• Machos adultos.
• Hembras ovígeras.
• Los piojos sueltos en el agua de la batea, que se cuela después de cada jaula y se informa aparte.

Reglas del conteo (Cermaq Chile, 2023):

• No se descartan los piojos que parecen muertos.
• Si un pez tiene más de 50 piojos, se puede contar un costado y multiplicar por dos.
• El promedio por pez es el total de cada estadio, incluida la batea, dividido por los 10 peces.
• También se cuenta antes y después de cada tratamiento, para calcular su eficacia.

Los umbrales. Un promedio de 3,0 o más hembras ovígeras por pez clasifica al centro como de alta diseminación (Sernapesca, 2022). Los detalles están en la ficha de Caligus rogercresseyi.

Vigilancia del agua

qPCR en agua. Un ensayo de qPCR detectó terontes de Ichthyophthirius en cantidades muy bajas en muestras de agua de río (Howell et al., 2019). Es una inferencia de Evidencia Vet: en una piscicultura con agua de río, analizar el agua de entrada permite saber si el parásito está llegando antes de ver peces enfermos.

Errores frecuentes

Error	Qué produce	Fuente
Montar en agua potable o destilada	Parásitos deformados o muertos	Zajac et al. (2021)
Raspar con fuerza	Daño de la piel e infecciones secundarias	Zajac et al. (2021)
Dejar secar la muestra antes de leerla	Se pierde el movimiento y la forma	Inferencia de Evidencia Vet
Puntuar solo el arco más afectado en un lote y todos en otro	Puntajes que no se pueden comparar	Fridman et al. (2021)
Descartar piojos que parecen muertos o no contar la batea	Conteo menor que el real	Cermaq Chile (2023)
Tomar un puntaje alto como diagnóstico de amebiasis	Se pasan por alto otras causas de daño branquial	Fridman et al. (2021)

Lo que no se sabe

• Qué tan de acuerdo están distintos operadores al puntuar branquias en los centros chilenos.
• Si el puntaje total de Fridman et al. (2021) funciona igual en otros centros y otras épocas del año.
• Cuántos piojos se pierden en el conteo según el anestésico y el manejo de la batea.

Referencias

Libro

1. Zajac, A. M., Conboy, G. A., Little, S. E., & Reichard, M. V. (2021). Parasites of fish. En Veterinary clinical parasitology (9.ª ed., pp. 347-366). Wiley-Blackwell.

Puntaje branquial y vigilancia

2. Fridman, S., Tsairidou, S., Jayasuriya, N., Sobolewska, H., Hamilton, A., Lobos, C., Houston, R. D., Rodger, H., Bron, J., & Herath, T. (2021). Assessment of marine gill disease in farmed Atlantic salmon (Salmo salar) in Chile using a novel total gross gill scoring system: a case study. Microorganisms, 9(12), 2605. https://doi.org/10.3390/microorganisms9122605
3. Howell, C. K., Atkinson, S. D., Bartholomew, J. L., & Hallett, S. L. (2019). Development and application of a qPCR assay targeting Ichthyophthirius multifiliis in environmental water samples. Diseases of Aquatic Organisms, 134, 43-55. https://doi.org/10.3354/dao03351
4. Taylor, R. (2016). Gill score guide. CSIRO y Tassal. https://research.csiro.au/aquaculture/resources/gill-score-guide

Fuentes de Chile

5. Cermaq Chile. (2023). Plan de gestión integrado de Caligus: programa de vigilancia y control (SAP-303, versión 07, junio de 2023). https://www.cermaq.com/assets/Plan-de-Gestion-Integrado-de-Caligus_-Programa-de-Vigilancia-y-Control.pdf
6. Servicio Nacional de Pesca y Acuicultura (Sernapesca). (2022). Programa Sanitario Específico de Vigilancia y Control de Caligidosis (Res. Ex. 60/2022) y Guía de vigilancia de Caligus (enero de 2022).